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PCR新手指南:PCR現(xiàn)在又?jǐn)U增不出來了怎么辦?
更新時間:2016-06-01 點擊次數(shù):2642
這個問題是常見的問題,就是一個PCR實驗一直都做得很好,停一段時間后再做就不行了。一通亂找原因后還是不行,很痛苦!
找問題要從大到小:
1、PCR擴增體系問題
用其他正在進行的且擴增正常的模板和引物證明PCR擴增體系沒有問題,即PCR反應(yīng)混合物、水、取液器、PCR儀、操作等都是好的(陽性對照)
2、引物問題
用以前擴增產(chǎn)物做模板(稀釋50倍),證明引物沒有問題
3、只是模板問題了。
因為樣本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是樣本中的抑制物過多(新鮮時沒有溶出來)。
不要靠運氣找問題,先做*條很重要。亂找問題常常讓人失去信心的。